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      抗體的制備概述
    1. 發(fā)布日期:2025-01-20      瀏覽次數(shù):181
      • 1、多克隆抗體的制備:

        ①免疫方法:對多克隆抗體,免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內(nèi)免疫法、淋巴結(jié)免疫法和混合法等。一般來說,皮下或肌肉免疫法產(chǎn)生的抗體比較多;皮內(nèi)免疫法所需的抗原量少,在抗原寶貴時特別適用,但與之相對的,它產(chǎn)生的抗體量也不多。混合免疫法的優(yōu)點是抗原用量小,產(chǎn)生抗體速度快。

        ②多克隆抗體的制備:將抗原免疫動物(常用的動物為兔、羊、狗等),分離出抗血清并純化抗體。多克隆抗體的均一性較差,其特異性相對較低,因此,多克隆抗體在農(nóng)藥殘留速測技術(shù)中的應用受到一定的限制。但近年來有學者恰恰利用了多抗的交叉反應高的特點,通過制備出具有某類(或某幾種)農(nóng)藥的“共性結(jié)構(gòu)"的半抗原或者通過制備出含多個抗原決定簇的人工抗原來制備“寬譜特異性"抗體,進行農(nóng)藥多殘留分析研究。

        2、單克隆抗體的制備:

        單克隆抗體制備技術(shù)最初是由K鰄ler和Milstein(1975)利用B淋巴細胞雜交瘤技術(shù)創(chuàng)立的。目前該技術(shù)已廣泛應用于疾病診斷及生物、醫(yī)學研究、環(huán)境和食品安全檢測(監(jiān)測)等方面。單抗均一性高,只和抗原某一決定簇結(jié)合,有更高的特異性,而且,產(chǎn)生抗體的單克隆細胞可在體外傳代繁殖,不受動物免疫時間限制生產(chǎn)抗體。只要管理和培養(yǎng)技術(shù)正確,抗體就可無限的產(chǎn)生。基本過程是動物免疫、細胞融合、克隆篩選、單克隆抗體性質(zhì)鑒定、腹水誘發(fā)、收集和純化等。

        3、重組抗體的制備:

        近年來,隨著蛋白質(zhì)技術(shù)及DNA重組技術(shù)的發(fā)展,人們通過對抗體產(chǎn)生的基因本質(zhì)、基因重組抗體篩選技術(shù)和直接定位誘導基因操縱技術(shù)的研究,獲得用于zhi定空間位置并具有各種特異性、親和性,能忍受一定溫度、pH和有機溶劑的人工重組抗體。一般是將抗原免疫小鼠,一定時間后無菌條件下取出小鼠脾臟,提取脾細胞總RNA,以RNA逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板,PCR擴增抗體,將抗體中的輕鏈、重鏈連接成ScFv(single-chainvariablefragment)。酶切經(jīng)PCR擴增的ScFv片段,并與噬菌體載體連接,然后以常規(guī)方法轉(zhuǎn)化入大腸桿菌或其他生物體中。人工培養(yǎng)帶有噬菌體抗體的大腸桿菌,即得到重組抗體。該方法生產(chǎn)抗體速度快,可通過誘變改變抗體特性,使抗體的特異性更強,而且,利用這項技術(shù)獲得的噬菌體抗體庫,能同時識別多種農(nóng)藥,可用于農(nóng)藥多殘留免疫速測技術(shù)的研究。


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